Virginia Gonzales, José Luis Ianiro

Rev HPC ; :

RESUMEN
El conocimiento de las frecuencias alélicas y haplotípicas de los antígenos de histocompatibilidad en la Argentina es limitado. Al sur de la ciudad de La Plata no existen datos reportados de frecuencias alélicas o de desequilibrios de unión.
El objetivo del presente trabajo fue analizar en forma retrospectiva 411 muestras de pacientes en tratamiento de diálisis, potenciales donantes de órganos y personas en estudios de filiación concurrentes al Hospital Privado de Comunidad de la ciudad de Mar del Plata, con el fin de determinar las frecuencias de antígenos de histocom-patibilidad de clase I, de clase II y evaluar posibles desequilibrios de unión entre los haplotipos encontrados.
Los antígenos de clase I fueron tipificados por medio de técnicas serológicas y los de clase II por técnicas de biología molecular (SSP). Posteriormente se calcularon las frecuencias alélicas y los desequilibrios de unión.
Dentro de los antígenos de clase I, en el locus A el alelo A2 fue el más frecuente (22,7%), ningún otro llegó al 10%. En el locus B los alelos B35 (13,4%), B44 (10,6%) y B51 (9,1%) fueron los más destacados. En clase II, los alelos DR1 (11,3%), DR4 (19,3%), DR11 (10,1%), DR13 (12,2%), y DR17 (10,1%) se encontraron entre los más frecuentes.
El haplotipo estadisticamente más significativo fue el A3/B7, un haplotipo característico de poblaciones caucásicas; otros haplotipos con desequilibrios de unión típicos de población caucásica encontrados fueron: A2/B44, A29/B44 y A30/B18.  También se hallaron desequilibrios de unión en varios haplotipos característicos de población amerindia (A28/B35, A31/B39 y A31/B62).

ABSTRACT
The knowledge of allele and haplotype frequencies of histocompatibility antigens in Argentina is limited. South of the city of La Plata there are no data reported allele frequencies or linkage desequilibrium.
The aim of this study was to retrospectively analyze 411 samples in dialysis patients, potential organ donors and people in parentage studies concurrent to Hospital Privado de Comunidad of the city of Mar del Plata, in order to determine the frequencies histocompatibility antigen class I, class II and evaluate possible linkage desequilibrium between haplotypes found.
Class I antigens were typed using standard serological and class II by molecular biology techniques (SSP). Then we calculated the allele frequencies and linkage desequilibrium.
Within the class I antigens in locus A allele A2 was the most frequent (22.7%), no other reached 10%. In the B locus alleles B35 (13.4%), B44 (10.6%) and B51 (9.1%) were the highlights. In class II alleles DR1 (11.3%), DR4 (19.3%), DR11 (10.1%), DR13 (12.2%), and DR17 (10.1%) were found between more frequent.
The statistically most significant haplotype A3/B7 was a characteristic of Caucasian populations haplotype, other haplotypes with typical linkage desequilibrium Caucasian population were found: A2/B44, A29/B44 and A30/B18.  Linkage desequilibrium were also found in several characteristic of Amerindian haplotypes (A28/B35, A31/B39 and A31/B62).

INTRODUCCIÓN
El sistema HLA, codificado por los genes del Complejo Mayor de Histocompatibilidad, es un complejo genético altamente polimórfico por lo que se ha utilizado como una herramienta de gran versatilidad en el estudio de la variabilidad inter e intrapoblacional, así como en cuestiones relacionadas con la inmunogenética, genética forense y susceptibilidad a enfermedades (1).
Además, con el advenimiento de la biología molecular se ha incrementado el número de alelos y con ellos su polimorfismo y, como consecuencia de esto, su poder discriminativo.
En Argentina, en lo que respecta a estudios poblacionales utilizando el sistema HLA, son escasos los realizados en población urbana, siendo la composición de estas muy variada debido al menor o mayor aporte migratorio que cada urbe ha recibido en el pasado (2 - 4).
En Mar del Plata no hay estudios poblacionales a la fecha y, si bien la población estudiada es exclusivamente la que ha concurrido al Hospital Privado de Comunidad, podría ser un acercamiento a la composición genética general de los pobladores de Mar del Plata y la zona. Resulta interesante poder usar estos datos para compararlos con los ya existentes en otras localidades del país.

MATERIALES Y MÉTODOS
Se estudiaron 411 personas de ambos sexos que concurrieron al Hospital Privado de Comunidad de la ciudad de Mar del Plata entre los años 2003 y 2011. La muestra estaba formada por pacientes en tratamiento de diálisis, potenciales donantes de órganos y personas en estudios de filiación.
En todos los casos se realizó la tipificación de los antígenos de histocompatibilidad de clase I (HLA- A y B) mediante la técnica de microlinfocitotoxicidad descriptas por Terasaki y modificadas por el NIH (5), utilizando placas del Collaborative Transplant Study (CTS), dirigido por el Dr. G. Opelzs (Heidelberg, Alemania).

A un subgrupo (168 individuos) se le realizó además la tipificación para antígenos de histocompatibilidad de clase II (HLA–DRB1) por medio de técnicas de biología molecular (SSP-PCR: Sequence Specific Primer), con primer del CTS.
Para el análisis de los desequilibrios de unión y de las frecuencias haplotípicas se descartaron aquellos individuos que tenían un vínculo sanguíneo directo, realizándose los cálculos sobre un total de 113 pacientes (226 haplotipos). 

ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Para el análisis estadístico de los datos se empleó el programa Statdisk 10.4.0., utilizando la distribución de Poisson en el cálculo de los desequilibrios de unión y el test de Chi2 para la comparación de  las frecuencias alélicas de nuestra población con las de los datos disponibles.

RESULTADOS
En los locus A, B y DRB1 se estudiaron 17, 34 y 15 especificidades respectivamente de un total de 822, 822 y 336 alelos respectivamente, obteniendo las frecuenciasalélicas mostradas en las tablas I.

Tabla I. Frecuencias alélicas obtenidas en nuestro Laboratorio.

Los datos obtenidos de las diferentes especificidades de los locus A y B se compararon con datos disponibles del Workshop Latinoamericano de Histocompatibilidad (tablas II y III) (6). Las especificidades de los antígenos de clase II fueron comparadas con los datos del PRICAI (tabla IV) (3).

Tabla II. Comparación de las valores del locus A. En negrita se resaltan los valores significativos.

Tabla III. Comparación de las valores del locus B.

Tabla IV. Comparación de las valores del locus DRB1. En negrita se resaltan los valores significativos.

Los haplotipos fueron evaluados utilizando el estadístico de Poisson, encontrándose desequilibrio de unión en los haplotipos listados en la tabla V.

DISCUSIÓN
La tabla de frecuencias alélicas (Tabla I) muestra un perfil similar de los alelos más frecuentes, A2 (22,7%), B35 (13,4%), B44 (10,6%) y B51 (9,1%), a las frecuencias halladas en el resto del país 2,4 y en el Workshop Latinoamericano6 y otros paises latinoamericanos7-10. Si bien algunas muestras pertenecen a individuos emparentados, las mismas resultan adecuadas para indagar las particularidades genéticas y étnicas de nuestra población, ya que  la consanguinidad en una muestra tiene poco efecto sobre la estimación de las frecuencias alélicas, provocando sobre todo un aumento en la varianza de las estimaciones2.
Los valores hallados en los locus HLA-A y HLA-B de nuestra población fueron comparados con las tablas del Workshop Latinoamericano6 mientras que los del locus HLA-DR se compararon con datos del PRICAI3 encontrandose diferencias significativas (Chi2 > 1,96) en los alelos destacados en negrita en las tablas II, III y IV. Estos valores fueron cotejados con los hallados en distintas zonas del país. En forma general nuestros datos son muy similares a los hallados en el Noroeste Argentino 2 y en la región de Cuyo 4, notándose ciertas discrepancias con los de La Plata y Buenos Aires (4).
En particular se observa que la frecuencia del alelo A28 (Antígeno frecuente en poblaciones amerindias) se asemeja a la hallada en la región de Cuyo y del NOA, siendo superiores a las de La Plata y Buenos Aires, y, más aún a los del Workshop. Algo similar se ve en el alelo A31, pero en este caso la frecuencia en La Plata fue mayor4.
En el locus B notamos buena concordancia con los valores hallados en las distintas zonas del país existiendo diferencias con la tabla del Workshop Latinoamericano. Esta diferencia es muy notoria en el alelo B60, en el que nuestro valor es semejante al resto del país.
En el locus DR el único alelo con diferencias significativas es el DR17, esta diferencia no se observa con otros datos de la misma Ciudad de Buenos Aires (Hospital Italiano)4, mientras que en La Plata y en Cuyo se encontraron valores intermedios (4).
En la Tabla V se muestran los haplotipos que presentan desequilibrio de unión. Cuatro de ellos (A2/B44, A3/B7, A29/B44 y A30/B18) son desequilibrios típicos de caucásicos, mientras que otros tres (A28/B35, A31/B39 y A31/B62) son marcadores amerindios (2,6,8,9).
A pesar de haber encontrado un alto componente amerindio en los haplotipos hallados se destaca el haplotipo A3/B7 con mayor desequilibrio de unión, el cual es frecuente en poblaciones caucásicas europeas.

CONCLUSIONES
De los datos obtenidos podemos concluír que la población de Mar del Plata y la zona estudiada posee una distribución genética compuesta por haplotipos típicos caucásicos así como de haplotipos típicos amerindios, lo cual es concordante con estudios poblacionales realizados en el Partido de General Pueyrredón (11), en los cuales se destaca que en el Censo del año 1947 la población estaba compuesta por un 20,3% de personas oriundas de países extranjeros (Italia y España mayorit-ariamente) y alrededor del 14,3% de personas procedentes de otras provincias argentinas (sobre todo de la zona Noroeste). En el Censo de 1991 los migrantes del interior del país aumentaron su volumen en más de cinco veces y su porcentaje creció a un 18,2 %. Esto explicaría la elevada frecuencia del alelo A28 así como de los haplotipos A28/B35, A31/B39 y A31/B62 muy similar a la de regiones del interior.
Si bien en términos generales los alelos más frecuentes tienen una correlación buena con los datos del Workshop Latinoamericano de Histocompatibilidad, ciertos alelos, tales como A28, A31, B41 y B60 muestran discrepancias notorias. Por tal motivo sería conveniente en el futuro la utilización de datos  locales ya sea en estudios poblacionales y/o médicos en los que se deban utilizar frecuencias alélicas.

AGRADECIMIENTOS
Queremos agredecer la colaboración del Dr. Sergio Gonorazky y de la Dra Lila Ricci.

BIBLIOGRAFÍA
1. Noel R. Rose et al. Manual of Clinical Laboratory Immunology, Washington, D.C.: 5th de. American Society for Microbiology, 1997.
2.  Alfaro E., Dipierri J., Gutierrez N., Vullo C.. “Frecuencias génicas y haplotípicas del sistema HLA en el Noroeste argentino”.  Antropo,  2004: 6, 15-23.
3. Raimondi, E. H. Argentina Normal. Comunicación personal. PRICAI (Primer Centro Argentino de Ig).
4. Gonzalez Galarza F.F, Christmas S., Middleton D., Jones A. Allele frequency net: a database and online repository for immune gene frequencies in worldwide population. Allele*Frequencies in Worldwide Populations. http://www.allelefrequencies. net/default.asp
5  Terasaki P I and Park M. S.. “Manual of Tissue Typing Techniques, National Institud of Allergy and Infectious Diseases”, Bethesla, 1979.
6.  Cuarto Workshop Latinoamericano de Histocompatibilidad, Buenos Aires, Argentina, 1985.
7. Barsuna, Laura. “Determinación de HLA en estudios de poblaciones y migraciones humanas”. Rev. med.Hosp.Nac.Niños (Costa Rica). v.38 n. 1-2 San José 2003. 
8. Rodriguez Libia, Giraldo Mabel, Garcia Natalia, Velazquez Laura, Paris Sara, Alvarez Cristiam y Garcia Luis. “Frecuencias alélicas, genotípicas y haplotípicas HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1 en donantes fallecidos Medellín Colombia”. Biomédica, diciembre 2007, vol.27, 537-547. número 004.
9. Bengochea Milka, Alvarez Inés y Hidalgo Pedro C. “HLA-A, -B, -DR en receptores de transplante de médula ósea en Uruguay”. Rev. Méd. Urug. v.19 n.2 Montevideo ago. 2003.
10.- Fuentes Angie P. “frecuencias génicas del sistema HLA clase I y II en una población de la ciudad de Bogotá d.c..http://www.monografias. com/trabajos12/arthla/arthla.shtml
11. Lucero P. Dinámica demográfica y configuración territorial de Mar del Plata y el Partido de General Pueyrredón en la segunda mitad del siglo XX. Universidad Nacional de Mar del Plata. http://www.redadultosmayores.com.ar/buscador/files/ARGEN036_LUCERO.pdf

Tabla V. Haplotipos con desequilibrio de unión